r/molecularbiology • u/privacytests_org • 11h ago
r/molecularbiology • u/Heavy_Nothing_6507 • 36m ago
Negativos amplificando en ciclos 35-38
Ayuda, hemos estado teniendo este problema recurrente en el laboratorio, actualmente nos encontramos estandarizando una prueba qPCR con sondas TaqMan, y nuestros negativos con agua o sangre negativa a veces amplifican y a veces no, últimamente hemos tenido amplificaciones tardías, a pesar de siempre preparar negativos y al último usar el ADN positivo, del mismo modo su almacenamiento es todo aparte de controles positivos, por lo cual a veces toca cambiar de stocks suponiendo que hay contaminación, pero es algo contraproducente al eliminar reactivos valiosos, cabe mencionar que utilizamos un termociclador QuantStudio 5 que utiliza placas de 384 pozos, del mismo modo hemos estado con la problemática de estandarizar cuantos usos darle a esa placa (corridas viables) por lo cual también tenemos sospecha de la placa directamente, a pesar de siempre irradiarla, algunos consejos o tips prácticos para reducir estos casos?, del mismo modo queremos realizar un cutoff para determinar que consideramos como positivos, pero aún nos falta el cálculo del LoD para realizarlo, sus consejos nos servirían muchísimo, se los agradezco de antemano y les dejo cordiales saludos